Введение. Легочный фиброз – одно из тяжелых заболеваний легких, имеющее высокий риск смертности и функциональных нарушений. Блеомициновая модель легочного фиброза грызунов является одной из наиболее распространенных и часто используемых. Комплексные методики исследования депарафинированных тканей позволяют получить ценную информацию о морфологических, микроструктурных и химических изменениях в тканях без проведения отдельных исследований, на уже существующем материале. Целью данного исследования было выявление методом сканирующей электронной микроскопии характерных морфологических изменений в депарафинированных образцах легких на модели легочного фиброза, вызванного интратрахеальным введением блеомицина крысам. Материалы и методы. В работе моделировали развитие фиброза легких на крысах-самцах Вистар массой 200–250 граммов путем интратрахеального введения блеомицина. Спустя 28 дней легкие перфузировали 4% раствором нейтрального забуференного формалина через полую вену до остановки сердца, образцы дофиксировали 10% забуференным формалином в течение 36 часов, проводили через спирты и заливали в парафин. Для проведения сканирующей электронной микроскопии толстые, 250 мкм, срезы депарафинировали в ксилоле и спирте, насыщали гексаметилдисилазаном и высушивали на воздухе. После напыления золотом образцы просматривали и фотографировали на настольном электронном микроскопе JCM-7000. Результаты. При помощи световой микроскопии признаки фиброза были обнаружены во всех исследованных препаратах легких крыс из экспериментальной группы. При этом выявлена очаговость развития фиброза и выделены три типа структурных изменений: 1) незначительные отличия от показателей в контрольной группе, 2) признаки воспаления с начальными явлениями образования коллагена, 3) области с полностью завершенным фиброзом. Заключение. Применение сканирующей электронной микроскопии толстых срезов значительно расширяет возможности исследования легких при таких патологиях как фиброз, позволяя исследовать ультраструктуру поверхности с высоким разрешением, а также идентифицировать различные включения, вызывающие патологические изменения, обнаруживаемые с помощью метода рентгеновского микроанализа. Такой подход позволяет просто, быстро и недорого подготавливать образцы для сканирующей электронной микроскопии из архивных парафиновых блоков и дает более детальную структурную информацию о развитии фиброза легких.
Introduction. Pulmonary fibrosis is a serious lung disease with high risks of mortality and functional impairments. The model of bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rodents is one of the most common and frequently used models. Complex methods for analyzing dewaxed tissues enable us to obtain valuable information about morphological, microstructural, and chemical changes in tissues using the existing material, i.e., without conducting separate studies. The purpose of this paper was to identify characteristic morphological changes in a model of bleomycin-induced pulmonary fibrosis, the medication being administered intratracheally, using scanning electron microscopy (SEM) in deparaffinized lung samples. Materials and methods. The experiment included male Wistar rats weighing 200–250 g, in which pulmonary fibrosis was modeled by intratracheal administration of bleomycin. After 28 days, the lungs were fixed with perfusion of a 4% solution of neutral buffered formalin through the vena cava until cardiac arrest. The samples were further fixed with 10% buffered formalin for 36 hours, plunged into alcohols, and embedded in paraffin. For SEM, thick 250-μm sections were deparaffinized in xylene and alcohol, saturated with hexamethyldisilazane, and air-dried. After gold sputtering, the samples were viewed and photographed under a JCM-7000 benchtop electron microscope. Results. Light microscopy revealed signs of fibrosis in the lungs of all experimental rats. The fibrosis was local. We distinguished three types of structural changes: 1) slight structural differences from the control animals, 2) inflammation with initial signs of collagen formation, and 3) areas with complete fibrosis. Conclusion. The use of SEM in analyzing thick sections significantly expands the possibilities of studying the lungs in such pathologies as fibrosis and allows one to examine high-resolution surface ultrastructures and identify various inclusions that cause pathological changes seen with X-ray microanalysis. This approach is simple, fast, and low-cost to prepare samples for SEM using existing paraffin blocks and provides more detailed structural information about the development of pulmonary fibrosis.