Использование левамизола для блокирования кишечной формы щелочной фосфатазы при проведении иммуногистохимических реакций

Н.А. Олейникова; О.А. Харлова; Н.В. Данилова; И.А. Михайлов; П.Г. Мальков

doi:10.31088/CEM2020.9.3.74-79

Н.А. Олейникова ФГБОУ ВО Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, Москва, Россия http://orcid.org/0000-0001-8564-8874
О.А. Харлова ФГБОУ ВО Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, Москва, Россия http://orcid.org/0000-0002-5909-1248
Н.В. Данилова ФГБОУ ВО Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, Москва, Россия http://orcid.org/0000-0001-7848-6707
И.А. Михайлов ФГБОУ ВО Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, Москва, Россия http://orcid.org/0000-0001-8020-369X
П.Г. Мальков ФГБОУ ВО Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, Москва, Россия http://orcid.org/0000-0001-5074-3513

DOI: https://doi.org/10.31088/CEM2020.9.3.74-79

Аннотация

Введение. Проведение иммуногистохимических реакций непрямым методом с хромогенной меткой требует использования ферментов, одним из которых является щелочная фосфатаза (ЩФ). ЩФ присутствует в тканях организма и может расщеплять молекулы иммуногистохимического субстрата, что приводит к выраженному фоновому окрашиванию. Для уменьшения этого эффекта перед постановкой иммуногистохимической реакции необходимо заблокировать эндогенные ферменты. Одним из способов блокировки эндогенной щелочной фосфатазы является использование растворов левамизола. Цель данной работы – описать методику использования левамизола для блокирования кишечной формы щелочной фосфатазы при проведении иммуногистохимических реакций.

Материалы и методы. В статье приводится расчет получения 0,001М рабочего раствора левамизола из 10% официнального ветеринарного препарата гидрохлорида левамизола производства Livisto Invesa Industrial Veterinaria S.A., Испания. Проверка инактивации кишечной формы ЩФ проводилась при постановке реакции с одним маркером (PDGFRb) и двумя маркерами (FAP и SMA) на материале рака толстой кишки. Для выявления двух маркеров на одном срезе нами был использован набор фирмы Abcam ab210061 DoubleStain IHC Kit: M&R on human tissue (HRP/Green&AP/Red, Великобритания) по методике, рекомендованной производителем, с некоторыми изменениями.

Результаты. При проведении иммуногистохимической реакции достигнуты полное отсутствие фонового окрашивания и яркая контрастная реакция с антителами (как с одним, так и с двумя на одном срезе) с использованием 1мМ левамизола, что свидетельствует о достаточной инактивации кишечной изоформы ЩФ в материале рака толстой кишки. Проведенный сравнительный анализ затрат на стекло при использовании готовых коммерческих блокирующих реагентов и официнального раствора левамизола показывает значительную экономическую выгоду последнего.

Заключение. Высокое качество реакции и большая экономическая выгода открывают возможности к применению 1мМ раствора левамизола в практической лабораторной диагностике и научной работе при проведении иммуногистохимических исследований.

Ключевые слова: левамизол, иммуногистохимия, щелочная фосфатаза