Гистоморфометрическое исследование мышечной ткани дисферлин-дефицитных мышей линии Bla/J при системной терапии посредством ААВ9.ДИСФ.ДВ

Аннотация

Введение. Дисферлинопатия представляет собой группу тяжелых мышечных дистрофий, для которых в настоящее время не существует одобренной этиопатогенетической терапии. Использование рекомбинантных аденоассоциированных вирусов ограничено малым размером вирусного капсида, не вмещающим полноразмерный ген DYSF. Целью работы стало гистоморфометрическое исследование скелетной мышечной ткани после системного введения оригинальной двухвекторной перекрывающейся системы на основе аденоассоциированных вирусов на модели дисферлинопатии.

Материалы и методы. В исследовании in vivo взрослым самцам мышей линии Bla/J (возраст 7 месяцев) однократно внутривенно вводили препарат ААВ9.ДИСФ.ДВ в дозе 5×10¹² вг/кг (n=14). В качестве групп сравнения были включены группы отрицательного (самцы линии Bla/J, n=10) и положительного (интактные самцы линии C57BL/6J, n=10) контроля, которым было выполнено введение физиологического раствора. Через 3 месяца и 6 месяцев скелетные мышцы задних конечностей – икроножную, переднюю большеберцовую и латеральную широкую мышцу бедра (m. gastrocnemius, m. tibialis anterior, m. vastus lateralis) – оценивали методами иммунофлуоресценции и гистоморфометрии.

Результаты. Иммунофлуоресцентный анализ подтвердил сборку и восстановление синтеза белка дисферлина in vivo во всех изученных мышцах. На сроке 3 месяца зафиксирован выраженный гистопротекторный эффект: тенденция к снижению доли некротизированных волокон по сравнению с отрицательным контролем, а также достоверное увеличение площади поперечного сечения волокон в m. gastrocnemius (p=0,012) и m. tibialis anterior (p=0,015). К 6-му месяцу зарегистрирован возврат показателей к уровню отрицательного дистрофического контроля, обусловленный эписомальной дилюцией вектора на фоне непрерывных циклов дегенерации и регенерации мышечной ткани. Тем не менее системное введение вектора обеспечило устойчивую стабилизацию в m. gastrocnemius, предотвратив нарастание доли волокон с интернализированными ядрами (p=0,572 в экспериментальной группе по сравнению со значимым ухудшением отрицательного контроля, p=0,032).

Заключение. Системное применение разработанной двухвекторной конструкции ААВ9.ДИСФ.ДВ обеспечивает стабильный во времени синтез дисферлина и оказывает гистопротекторное действие, ослабевающее к 6 месяцам. Полученные данные свидетельствуют о работоспособности конструкции при системной доставке и указывают на необходимость ее оптимизации для удержания достигнутого эффекта.

Ключевые слова: дисферлинопатия, генная терапия, поясно-конечностная мышечная дистрофия типа R2, аденоассоциированный вирус (ААВ), двухвекторная система, Bla/J, гистоморфометрия