Оптимизация пробоподготовки гистологических образцов тканей Danio rerio с применением изопропанола и минерального масла

Аннотация

Введение. Рыбы Danio rerio являются одним из популярных объектов для проведения биомедицинских исследований – как фундаментальных, так и прикладных. Они удобны прежде всего простотой и относительной дешевизной содержания, наличием отработанных протоколов моделирования патологических состояний, относительной легкостью наблюдения за стадиями эмбрионального развития. Для оценки фенотипических проявлений патологий используют разные методы, в частности анализ гистологических срезов. Тем не менее проведение адекватного патоморфологического и патогистологического анализа возможно только при наличии препарата, лишенного артефактов. При этом качество в значительной степени определяется выбранной схемой пробоподготовки, включающей этапы фиксации, декальцинации и гистологической проводки исследуемых образцов. В литературе приведены методики подготовки гистологических препаратов Danio rerio, однако обращает на себя внимание отсутствие общепринятых протоколов пробоподготовки для различных тканей Danio rerio. В связи с этим целями настоящей работы были проверка применимости ряда существующих протоколов фиксации, декальцинации и стандартной проводки, а также адаптация режимов пробоподготовки под ручную проводку, основанную на использовании изопропанола и минерального масла, и определение оптимальных схем изготовления гистологических препаратов Danio rerio.

Материалы и методы. В качестве объекта исследования были выбраны взрослые самцы и самки (до нереста и после него) Danio rerio дикого типа возраста 7 месяцев.

Результаты. Проведенное исследование показало, что оптимальным фиксатором для любых образцов Danio rerio является 10% нейтральный забуференный формалин, за исключением исследования брюшной полости половозрелых самок до нереста. Для образцов, содержащих костную ткань, предпочтительна 24-часовая хелатная декальцинация с использованием 0.5М раствора этилендиаминтет­рауксусной кислоты рН 8,0.

Заключение. Гистологическая проводка с использованием изопропанола и минерального масла показала хорошие результаты и может быть признана эффективной и безопасной альтернативой классической проводке через этанол и ксилол в гистологии рыб.

Ключевые слова: Danio rerio, гистология, фиксация, декальцинация, изопропанол, минеральное масло