Сравнительная характеристика методов выделения клеток сперматогенного эпителия

Аннотация

Введение. Для изучения биохимических и молекулярно-биологических механизмов процессов сперматогенеза в норме и при его нарушениях необходимо получить изолированные клетки сперматогенного эпителия разных стадий дифференцировки. Клетки сперматогенного эпителия соединены между собой плотными контактами и цитоплазматическими мостиками, разрушение которых позволяет получить суспензию клеток. Для разделения клеток используют ряд методов, включая механический и ферментативные. Состав, концентрация ферментов и время воздействия, применяющиеся разными авторами, широко варьируют. Тем не менее работы по сравнительной оценке эффективности методов выделения клеток сперматогенного эпителия в литературе отсутствуют.

Цель исследования: проведение сравнительного анализа эффективности механического и ферментативных методов выделения клеток сперматогенного эпителия у мышей и определение оптимального способа.

Материалы и методы. В работе использованы самцы половозрелых мышей линии С57BL/6. Клетки выделяли в соответствии с протоколами ферментативных методов по M.L. Meistrich (n=10 – число семенников), Н.Н. Мушкамбарову (n=8) – с использованием ферментов коллагеназы, трипсина, ДНКазы в разных концентрациях, T.G. Pretlow (n=12) – с использованием фермента проназы, Y. Wang (n=8) – с применением фермента гиалуронидазы и механического метода по D. Lam (n=8). Оценивали количество полученных клеток на 1 мг ткани семенника, их жизнеспособность и наличие симпластов (реагрегатов).

Результаты. При использовании разных ферментов, включая проназу, после выделения клеток сперматогенного эпителия и через сутки хранения суспензии клеток в культуральной среде при температуре +4°С получено большое количество клеток сперматогенного эпителия, и их жизнеспособность составила 87–91%. При механическом методе выделения клеток сперматогенного эпителия количество полученных клеток было большим, но наблюдали их низкую жизнеспособность и прогрессирующую гибель в течение суток.

Заключение. По результатам сравнительного анализа оптимальным для выделения клеток сперматогенного эпителия является метод с проназой Е. Он позволяет получить достаточное количество жизнеспособных клеток с небольшим числом симпластов.

Ключевые слова: сперматогенный эпителий, сперматоциты, сперматиды, методы выделения