Оптимизация протокола получения культуры дермальных фибробластов крыс

Аннотация

Введение. Получение первичных культур фибробластов необходимо для проведения экспериментальных исследований по изучению базовых механизмов реакции клеток на различные стимулы. Несмотря на широкое использование культур фибробластов, методы их получения из кожи не стандартизированы. Целью исследования был подбор оптимальных условий для получения культуры фибробластов из соединительнотканной основы кожи – дермы крыс с помощью ферментативной дезагрегации ткани.

Материалы и методы. Культуру фибробластов получали из дермы крыс Вистар массой тела
60–65 граммов в возрасте 5–6 недель и массой 160–180 граммов в возрасте 8–10 недель. Проведена серия экспериментов по получению культуры фибробластов с подбором типа коллагеназы, ее концентрации и времени воздействия.

Результаты. Представлен оптимизированный протокол получения дермальных фибробластов крыс, обсуждаются проблемы получения культуры и практические аспекты ее использования.

Заключение. При получении первичной культуры фибробластов кожи крыс следует учитывать ряд факторов – тип фермента, его концентрацию, время воздействия, возраст животных, зону забора кожного лоскута. У молодых крыс оптимальный результат получен при выделении клеток из аксиллярной зоны с применением коллагеназы II типа в концентрации 1 мг/мл и времени воздействия 90 минут. При использовании лоскута кожи, полученного со спины взрослого животного, ферментативное воздействие коллагеназой II типа в концентрации 5 мг/мл в течение 120 минут было оптимальным.

Ключевые слова: культура фибробластов, дерма, протоколы получения, крысы